Optimización de un método para la determinación de una mezcla de compuestos orgánicos en suplementos alimenticios mediante HPLC

Abstract

[ES] En este trabajo se ha desarrollado un método para la determinación de 6 vitaminas hidrosolubles del grupo B, estas son: B1 (tiamina), B2 (riboflavina), B3 (nicotinamida), B5 (ácido pantoténico), B6 (piridoxina) y B7 (biotina) en cuatro suplementos alimenticios diferentes, en forma de zumos de frutas y grageas. El método desarrollado parte de una preparación de muestra basada en una extracción mediante digestión ácida-enzimática y una extracción líquido-líquido con metanol, para muestras líquidas, y una extracción sólido-líquido para muestras sólidas. Tras la preparación de la muestra por el procedimiento correspondiente, los extractos fueron analizados mediante cromatografía líquida de alta resolución/espectrometría de masas de trampa iónica tridimensional con ionización por electrospray (HPLC/ESI+MS). La ionización de los analitos se realizó en modo de ion positivo (PI). La identificación y confirmación de los compuestos de interés se basó en las medidas de masa de los iones seleccionados para cada compuesto, generalmente la molécula protonada y un fragmento de gran intensidad. La separación cromatográfica se llevó a cabo en una columna de gel de sílice C18 en fase reversa (125 mm x 3 mm). Respecto a la fase móvil, se trabajó en modo de gradiente de elución, empleando metanol y una disolución acuosa heptafluorobutírico (5 mM) de Optimización de un método para la determinación de una mezcla de compuestos orgánicos mediante HPLC 2 ácido, el cual actuaba como formador de pares iónicos. El pH de la fase móvil se sitúa en torno a 2.4  0,2. Para la cuantificación se utilizó como patrón interno taurina. Se estudió el rango dinámico lineal de 0.05 a 20 ppm, y se alcanzaron límites de detección de 0,021 a 1,520 ppm para el modo full scan, y de 0,015 a 0.303 ppm para el modo MRM.

[EN] In this paper, we has developed a method for determining 6 water soluble vitamins about B group, these are: B1 (thiamine), B2 (riboflavin), B3 (nicotinamide), B5 (pantothenic acid), B6 (pyridoxine) and B7 (biotin) in four different nutritional supplements in the form of fruit juices and tablets. The developed method of sample preparation based on extraction by acid-enzymatic digestion and liquid-liquid extraction with methanol to liquid samples and a solid-liquid extraction for solid samples. After preparation of the sample by the corresponding procedure, extracts were analyzed by high performance liquid chromatography/mass spectrometry ion trap with electrospray ionization (HPLC/ESI+MS). The ionization of the analytes was performed in positive ion mode (PI). Identification and confirmation of compounds of interest was based on mass measurements of selected ions for each compound, usually the protonated molecule and a fragment of great intensity. Chromatographic separation was performed on a column of silica gel reverse phase C18 (125 mm x 3 mm). Regarding the mobile phase was worked-mode gradient elution using methanol and an aqueous solution of heptafluorobutyric acid (5 mM), which acted as forming ion pairs. The pH of the mobile phase is about 2.4  0.2. For quantification, taurine was used as internal standard. The linear dynamic range was studied from 0,05 to 20 ppm, and detection limits of 0,021 to 1,520 ppm for the full scan mode, and 0,303 to 0,015 ppm for the MRM mode.