Expresión y purificación parcial de la Metionina sulfóxido reductasa de Arabidopsis thaliana

Abstract

[ES]Las especies reactivas de oxígeno (ROS) y de nitrógeno (RNS) son moléculas altamente tóxicas producidas durante los procesos fisiológicos del metabolismo aeróbico. Los niveles de estas moléculas aumentan en condiciones de estrés dañando macromoléculas como ácidos nucleicos, carbohidratos, lípidos o proteínas. De entre las modificaciones oxidativas que sufren las proteínas cabe destacar la oxidación de residuos de metionina, lo que conduce a la formación de sulfóxido de metionina (MetSO), que puede modificar la conformación de proteínas alterando su funcionalidad. La enzima denominada Metionina sulfóxido reductasa (MSR) cataliza la reducción del MetSO. En este trabajo se realizó la expresión y purificación parcial de la proteína MSRB7 de cultivos celulares de Arabidopsis thaliana, utilizando para ello el vector de expresión pFLAG-ATS y técnicas de inmunoafinidad para llevar a cabo la recuperación de la proteína. Los resultados obtenidos demuestran que una inducción de la expresión durante 24 horas a 20 ºC incrementaba la sobreexpresión de la proteína y que la elución en condiciones ácidas utilizando bajas concentraciones de proteína mostraba un mayor rendimiento en la recuperación de la proteína purificada.

[EN]The oxygen and nitrogen reactive species (ROS and RNS) are highly toxic molecules produced during the processes physiological of aerobic metabolism. The levels of these molecules increase in stress conditions damaging macromolecules such as nucleic acids, carbohydrates, lipids or proteins. Among the oxidative modifications suffered proteins include the oxidation of methionine residues, which leads to the formation of methionine sulfoxide (Metso) which can modify protein conformation altering their functionality. Methionine sulfoxide enzyme called reductase (MSR) catalyses the reduction of MetSO. In this study the expression and partial purification was performed MSRB7 cell culture protein from Arabidopsis thaliana, using the expression vector pFLAG-ATS and inmunoaffinity techniques for it to carry out the recovery of the protein. The results show that induction of expression for 24 hours at 20 °C increased the protein overexpression and elution under acidic conditions using low protein concentrations showed a higher yield in the recovery of the purified protein.