Caracterización de nuevos anticuerpos para el estudio de la expresión génica

Abstract

[ES]La transcripción en la mayoría de los eucariotas se realiza mediante 3 ARN polimerasas (ARN pol I, II y III), que son las encargadas de sintetizar distintos tipos de transcritos. En plantas se han descrito, además, las ARN pols IV y V. Una de las subunidades de la ARN pol II es Rpb1, la subunidad mayor del complejo. La subunidad Rpb1 presenta un dominio sobresaliente del resto de la polimerasa, llamado CTD. Otra subunidad común a las 3 ARN pols es Rpb5, la única no intercambiable entre la levadura Saccharomyces cerevisiae y humanos. Este trabajo tiene como finalidad, analizar las características de nuevos anticuerpos generados por el grupo del Dr. Navarro frente a las subunidades Rpb1 y Rpb5, con objeto de poder utilizarlos en estudios de regulación de la expresión génica en Saccharomyces cerevisiae. Para poder llevar a cabo este estudio se realizaron experimentos de genética clásica, genética molecular y bioquímica, partiendo de cepas de S. cerevisiae, silvestre y mutantes para distintas subunidades de la ARN pol II. Nuestros resultados han permitido caracterizar nuevos anticuerpos frente a subunidades de las ARN polimerasas, y comparar su eficacia frente a otros anticuerpos comerciales en distintos procedimientos experimentales ampliamente usados para el estudio de la expresión génica.

[EN]Transcription in most eukaryotes is performed by three RNA polymerases (RNA pol I, II and III), which are responsible for different types of transcripts. In plants the RNA pols IV and V have also been described. One subunit of RNA pol II is Rpb1, the largest subunit of the complex. The Rpb1 subunit contains a CTD domain, protruding the rest of the polymerase. Another subunit, common to the three RNA pols, is Rpb5, the only non-exchangeable between human and yeast Saccharomyces cerevisiae. This work aims to analyze the characteristics of new antibodies generated by the group of Dr. Navarro against the Rpb1 and Rpb5 subunits, in order to be able to use them in studies of gene expression regulation in Saccharomyces cerevisiae. To carry out this study, experiments of classical genetics, molecular genetics and biochemistry were performed, starting from S. cerevisiae strains, wild-type and mutant for different RNA pol II subunits. Our results have allowed to characterize new antibodies against subunits of the RNA polymerases, and compare their eficiency against other commercial antibodies in different experimental procedures widely used for the study of the gene expression.