Molecular genetic analysis of miR-195b mutant mice

Abstract

[ES]Antecedentes: varios estudios han mencionado los microARN por su papel fundamental en la modulación de los parámetros biológicos, incluidas las condiciones fisiopatológicas, especialmente las enfermedades cardiovasculares. Los datos previos generados en el Grupo de desarrollo cardiovascular de la Universidad de Jaén sugirieron que miR-195b es prescindible para el desarrollo embrionario como así como para la homeostasis de órganos adultos. El presente estudio se centra en analizar la respuesta de los ratones con deficiencia de miR-195b a los ataques cardíacos mediante la exploración de la morfometría ventricular y la evaluación de los niveles de expresión relativos de marcadores moleculares distintos, como los factores de transcripción (Mef2c y Nkx2.5), microRNAs (miR -1, miR-133 y miR-29), ARN largos no codificantes (Miat) y conexina (Cx40). Métodos: los ratones nulos miR-195b generados por edición genética CRISPR / CAS9 (divididos en machos y hembras) y el control de CD1 (machos y hembras) se trataron claramente con isoproterenol o solución salina. Se aislaron corazones de estos ratones y se incrustaron en parafina. En este contexto, se estudiaron la morfometría ventricular, así como los grados de fibrosis, el acoplamiento célula-célula y la expresión de marcadores moleculares distintos, como factores de transcripción, microARN y ARN largos no codificantes. Resultados: Nuestros resultados muestran el efecto específico del isoproterenol que aumenta el peso del corazón en ratones. Además, el silenciamiento de miR-195b induce un agrandamiento del ventrículo derecho que se observó solo con ratones hembras deficientes en miR195b. A nivel molecular, el silenciamiento de miR195b induce alteraciones de los marcadores moleculares traducidos con una regulación positiva de algunos TF, miRNA y lncRNA que se detectaron solo con ratones mutantes machos. Conclusión: la administración de isoproterenol a ratones deficientes en miR-195b da como resultado un aumento del peso cardíaco de los ratones que puede estar correlacionado con el aumento del contenido de proteínas para Cx40. Además, se reveló una ampliación en el RV en miice mutante. A nivel molecular, el isoproterenol exhibe una expresión alterada de marcadores moleculares distintos. Palabras clave: miRNAs, miR195b, desarrollo cardiovascular, CRISPR / Cas9, TF, lesiones cardíacas (clorhidrato / isoproterenol). Cx40, Morfometría ventricular. Marcadores moleculares

[EN]Background: MicroRNAs have been mentioned by several studies for their critical roles of modulating biological parameters, including pathophysiological conditions particularly cardiovascular disease.. Previous data generated in the Cardiovascular development Group at the University of Jaen suggested that miR-195b is dispensable for embryonic development as well as for adult organ homeostasis. The present study focuses on analyzing the respond of miR-195b-deficient mice to cardiac insults by the exploration of the ventricular morphometry and assessing of relative expression levels of distinct molecular markers such as transcription factors (Mef2c and Nkx2.5), microRNAs (miR-1, miR-133 and miR-29), long non coding RNAs (Miat) and connexin (Cx40). Methods: miR-195b null mice generated by genetic editing CRISPR/CAS9 (divided into males and females) and CD1 control (males and females) were distinctly treated with isoproterenol or saline. Hearts were isolated from these mice and embedded in paraffin. In this context, the ventricular morphometry as well as the degrees of fibrosis, cell-cell coupling and the expression of distinct molecular markers such as transcription factors, microRNAs and long non coding RNAs were studied. Results: Our results show the specific effect of isoproterenol increasing the heart weight in mice. Furthermore, silencing of miR-195b induce an enlargement of right ventricle which was observed only with females miR195b deficient mice. At the molecular level, silencing miR195b induce alterations of molecular markers translated with an upregulation of some TF, miRNAs and lncRNAs that were detected only with males mutant mice. Conclusion: Isoproterenol administration’s to miR-195b deficient-mice results in increase of mice heart weight that may be correlated with the increase of protein content for Cx40. In addition, an enlargement at the RV was revealed in mutant miice. At molecular level, isoproterenol exhibit altered expression of distinct molecular markers. Keywords: miRNAs, miR195b, Cardiovascular development, CRISPR/Cas9, TF, Cardiac insults (hydrochloride/Isoproterenol). Cx40, Ventricular morphometry. Molecular markers