Escrutinios genéticos con mutantes de arn polimerasas en la levadura Saccharomyces cerevisiae

Abstract

[ES]La transcripción en eucariotas, en general, se realiza mediante 3 ARN polimerasas, la ARN pol I, II y III encargadas de sintetizar distintos tipos de transcritos. Estas son complejos mutiproteicos que comparten cinco subunidades comunes, entre ellas, Rpb5, la única subunidad común no intercambiable entre la levadura Saccharomyces cerevisiae y humanos. En este trabajo, con el fin de buscar genes que supriman el defecto de transcripción de un mutante de RPB5 en la levadura S. cerevisiae, se realizó un escrutinio genético masivo con la cepa YFN60 que expresa el alelo termosensible, rpb5-Δ14; y que confiere incapacidad de crecimiento a 37ºC. Para dicho escrutinio se usó una genoteca del genoma completo de S. cerevisiae, en plásmido multicopia, y seleccionando la capacidad de crecimiento a 37º C. Nuestros resultados han permitido identificar 48 supresores capaces de conferir crecimiento a 37º C al mutante rpb5-Δ14, en escrutinios genéticos de supresión con alta eficiencia.

[EN]In general, transcription in eukaryotes is mediated by three RNA polymerases, RNA pol I, II y III responsible for the synthesis of different types of transcripts. These are multiprotein complexes which share five common subunits, among them Rpb5, the only common subunit not interchangeable between the yeast Saccharomyces cerevisiae and humans. In this work, in an attempt to look for genes that suppress the defect of the transcription of a mutant of RPB5 in the yeast S. cerevisiae, we performed a genetic screening with the strain YFN60 expressing a thermo-sensitive allele rpb5-Δ14 that confers inability to grow at 37° C. For this screening a library containing the whole S. cerevisiae genome in multicopy plasmid was used and the ability to growth at 37º C was selected. 5 Ours results have identified 48 suppressors able to recover growth at 37º C for the mutant rpb5-Δ14, in suppression genetic screening with high efficiency.