MODULACIÓN POR ESPECIES DE NITROGENO REACTIVO DE LAS LIPOXIGENASAS EN Arabidopsis thaliana.

Abstract

[ES]El óxido nítrico (NO) es un radical libre gaseoso que participa en un amplio rango de funciones celulares como son el crecimiento y desarrollo de las plantas. El NO y las moléculas que derivan del mismo se conocen como especies de nitrógeno reactivo (RNS), que en función de su concentración en la célula, pueden actuar como moléculas señalizadoras en modificaciones post-traduccionales (S-Nitrosilación o nitración de tirosinas proteicas) o bien, generar efectos tóxicos y perjudiciales para la planta. En este trabajo hemos analizado el efecto nitrosativo que producen las RNS como es el GSNO (S-Nitrosoglutation) a distintas concentraciones para observar la nitrosilación que se genera en los aminoácidos de cisteínas de las enzimas lipoxigenasas que están presentes en extractos celulares de Arabidopsis thaliana. Para ello, se utilizaron técnicas espectrofotométricas para medir actividades enzimáticas, el ensayo biotin switch y western-blotting. Los resultados de este estudio indicaron modificaciones en la actividad de las enzimas lipoxigenasas que disminuía cuando incrementábamos los niveles de GSNO, pudiendo observarse un estrés nitrosativo a altas concentraciones de esta RNS.

[EN]Nitric oxide (NO) is a gaseous free radical that participates in a wide range of cellular functions such as the growth and development of plants. NO and the molecules derived from it are known as reactive nitrogen species (RNS), which, depending on their concentration in the cell, can act as signaling molecules in post-translational modifications (S-Nitrosylation or nitration of protein tyrosines ) or, generate toxic and harmful effects for the plant. In this work we have analyzed the nitrosative effect produced by RNS such as GSNO (S-nitrosoglutathione) at different concentrations to observe the nitrosylation that is generated in the amino acids of cysteines of lipoxygenase enzymes that are present in cellular extracts of Arabidopsis thaliana. For this spectrophotometric techniques were used to measure enzymatic activities, the biotin-switch assay and western-blotting. The results of this study indicated modifications in the activity of the lipoxygenase enzymes that decreased when we increased GSNO levels, being able to observe a nitrosative stress at high concentrations of this RNS.