PAPEL DEL REGULADOR TRANSCRIPCIONAL RTR1 EN DIVERSOS PROCESOS TRANSCRIPCIONALES

Abstract

[ES] La ARN pol II sintetiza todos los ARN mensajeros en eucariotas, en Saccharomyces cerevisiae comprende 12 subunidades diferentes (Cramer et al., 2000). La subunidad mayor, Rpb1, tiene un dominio carboxilo terminal (CTD) extendido y flexible, formado por la repetición de un heptapéptido (Meinhart et al., 2005). En el dominio CTD se concentran numerosas modificaciones postraduccionales, entre ellas la fosforilación/desfosforilación de Ser2, Ser5 y Ser7, mediado por kinasas y fosfatasas (Corden, 2013, Eick et al., 2013, Jeronimo, 2013, Jasnovidova, 2013). La proteína Rtr1 se ha descrito como la fosfatasa encargada de desfosforilar CTD-Ser5 en la transición del inicio de la transcripción a la elongación. La inactivación del gen provoca la acumulación de ARN pol II con el CTD-Ser5P (fosforilado); además los niveles de transcripción decrecen, y se observan errores en la terminación (Gibney et al., 2008; Mosley et al., 2009). Recientes estudios muestran que el gen ortólogo de RTR1, RPAP2, tiene un papel en el ensamblaje y transporte al núcleo de la ARN pol II (Boulon et al., 2010, Forget et al., 2013, Hsu et al., 2014). En este trabajo pretendemos profundizar en el papel del regulador transcripcional Rtr1 en la transcripción y en procesos de ensamblaje/desensamblaje de la ARN pol II en la levadura Saccharomyces cerevisiae. Para ello se realizan inmunoprecipitaciones de proteínas y análisis de Western-Blot.

[EN] RNA pol II synthesizes all messenger RNAs in eukaryotes, Saccharomyces cerevisiae comprises 12 different subunits (Cramer et al., 2000). The major subunit, Rpb1, has an extended and flexible carboxyl terminal domain (CTD), formed by the repetition of a heptapeptide (Meinhart et al., 2005). In the CTD domain, post-translational modifications are concentrated, including the phosphorylation/dephosphorylation of Ser2, Ser5 and Ser7, mediated by kinases and phosphatases (Corden, 2013, Eick et al., 2013, Jeronimo, 2013, Jasnovidova, 2013). The Rtr1 protein has been described as the phosphatase responsible for dephosphorylation of CTD-Ser5 in the transition from the start of transcription to elongation. Inactivation of the gene causes the accumulation of RNA pol II with CTD-Ser5P (phosphorylated); In addition, transcription levels decrease and observe errors in termination (Gibney et al., 2008, Mosley et al., 2009). Recent studies show that the orthologous gene of RTR1, RPAP2, plays a role in the assembly and transport to the nucleus of RNA pol II (Boulon et al., 2010, Forget et al., 2013, Hsu et al., 2014). In this paper we intend to dig into the role of the transcriptional regulator Rtr1 in the transcription and assembly/disassembly processes of RNA pol II in Saccharomyces cerevisiae yeast. Protein immunoprecipitations and Western blot analysis are performed.